.RU

Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по биологической химии - страница 4


Тест 12
Установите строгое соответствие
( один вопрос - один ответ )

^ Ферменты пируватоксидазной


системы:



Простетические группы


ферментов:



1) пируватдегидрогеназа
2)дигидролипоилацетилтрансфераза
3) дигидролипоилдегидрогеназа

а) HS – KoA
б) ТДФ
в) липоевая кислота
г) ФАД

Тест 13
Установите строгое соответствие
( один вопрос - один ответ )

^ Превращения ПВК:



Название процессов:



1) восстановление до лактата
2) карбоксилирование с образованием
оксалоацетата
3) превращение в аланин
4) образование ацетил-коА

а) глюконеогенез
б) гликолиз
в) окислительное декарбоксилирование
г) трансаминирование
д) гликогенолиз

Тест 14
Установите строгое соответствие
(один вопрос - один ответ)

Субстраты гликолиза

Продукты их превращения


1) глюкозо - 6 - фосфат
2) глицеральдегид - 3 - фосфат
3) фосфоенолпируват
4) глюкоза

а) диоксиацетонфосфат
б) фруктозо – 6 – фосфат
в) пируват
г) 1,3 - дифосфоглицерат
д) глюкозо - 6 - фосфат

Тест 15
Установите строгое соответствие
(один вопрос - один ответ)

^ Реакции гликолиза:



Биологическое значение

:

1) фосфорилирование глюкозы с помощью АТФ
2) превращение фруктозо-6-фосфата во фруктозо-1,6-дифосфат
3) превращение фосфоенолпирувата в пируват

а) реакция субстратного фосфорилирования
б) завершающая реакция подготовительного этапа гликолиза
в) образование активной формы глюкозы
г) скорость определяющая реакция

Тест 16
Дополните

^ Завершающая реакция гликолиза:


_____ + _____ = _____ + ________
Тест 17
Дополните

Скоростьопределяющая реакция гликолиза:


_____ + _______ в†’ _______ + _______
Тест 18
Дополните

^ Образование активной формы глюкозы:


______ + _____ в†’ ______ + _______
Тест 19
Дополните

Уравнение реакции, завершающей подготовительный этап гликолиза

:
_______________ в†’ ________ + _________
Тест 20
Дополните

^ Суммарное уравнение окислительного декарбоксилирования пирувата:


______ + _______ + _____ в†’ _______ + _______ + _______
Тест 21
Дополните

Этап гликолитической оксидоредукции начинается с реакции:


______ + ______ + ______ в†’ ______ + _______
Тест 22
Дополните
Биороль реакций

субстратного фосфорилирования

заключается
в синтезе ______ с использованием энергии ________ связи субстрата
Тест 23
Дополните

Глюконеогенез

- это процесс синтеза ________ из _________ веществ
Тест 24
Дополните

^ Механизм инактивирования пируватоксидазного комплекса тиоловыми

ядами заключается в блокировании __________ тиоловых ферментов и коферментов
Тест 25
Выберите все правильные ответы

^ Ингибиторы пируватоксидазной системы


а) СО б) СN в) Hg г) Н2О2 д) моноиодацетат
Тест 26
Выберите все правильные ответы

Ферменты пируватоксидазной системы:


а) дигидролипоилдегидрогеназа
б) пируваткиназа
в) дигидролипоилацетилтрансфераза
г) пируватдегидрогеназа
д) пируваткарбоксилаза
Тест 27
Выберите правильный ответ

^ Клетки, которые существуют только за счет гликолиза


а) гепатоциты
б) кардиомиоциты
в) эритроциты
г) лейкоциты
д) адипоциты
Тест 28
Дополните

В процессе гликолиза в расчете на одну молекулу глюкозы образуется ________ молекулы АТФ, а в процессе гликогенолиза ______


Тест 29
Дополните

Гликолиз – это процесс _________ окисления глюкозы, протекающий в _____________ клетки


Тест 30
Выберите правильный ответ

^ Гормоны, индуцирующие синтез ключевых ферментов


глюконеогенеза:


а) инсулин
б) глюкокортикоиды
в) глюкагон
г) минералкортикоиды
д)тиреоидные гормоны

Рћ Рў Р’ Р• Рў Р«


в„–1. - Рі в„–2 - Р° в„–3 - Рґ в„–4 - Р°,Р±,РІ,Рі
в„–5 - Р±,Рі,Рґ в„–6 - Р°,РІ,Рі,Рґ в„–7 - Рі в„–8 - РІ
в„–9 - Р°,РІ,Рі,Рґ в„–10 - Р±,РІ,Рґ в„–11 - 1Р°,2Рµ,3РІ,4Р±,5Рі
в„–12 - 1Р±,2РІ,3Рі в„–13 - 1Р±,2Р°,3Рі,4РІ
в„–14 - 1Р±,2Рі,3РІ,4Рґ в„–15 - 1РІ,2Рі,3Р°
№16 -пируват + НАДН+Н+ →→ лактат + НАД+
№17 - фруктозо-6-фосфат + АТФ →→ фруктозо-1,6-дифосфат +АДФ
№18 -глюкоза + АТФ → глюкозо-6-фосфат + АДФ
№19 - фруктозо-1,6-дифосфат →→ глицеральдегид-3фосфат + диоксиацетонфосфат
№20 -пируват + HS-КоА +НАД+ →→ацетил-КоА+ СО2 +НАДН+Н+
№21 - глицеральдегид-3фосфат + НАД+ + Н3РО4 →→ 1,3-дифосфоглицерат + НАДН+Н+
№22 - АТФ , макроэргической
№23 - глюкозы, неуглеводных
в„–24 - SH-РіСЂСѓРїРї
в„–25 - РІ Рі Рґ в„–26 - Р°,РІ,Рі в„–27 - РІ
№28 – 2, 3 №29 – анаэробное, цитоплазме №30 - б

  1. Тема: 11

    "

    Аэробный дихотомический распад углеводов.



^ Биологическое окисление."


Место проведения кафедра биохимии.
Продолжительность 180 минут.

2. Цель занятия:

Систематизировать знания по аэробному дихотомическому пути окисления глюкозы, полученные на предыдущих занятиях и рассмотреть следующие два этапа - цикл трикарбоновых кислот и цепь терминального окисления.

^ 3. Конкретные задачи:


3.1. Студент должен знать:
3.1.1. Этапы аэробного дихотомического окисления глюкозы и
роль каждого этапа.
3.1.2. Биологическую роль и влияние ингибиторов ЦТК.
3.1.3. Компоненты и ферменты цепи терминального окисления.
3.1.4. Значение челночных механизмов.
3.2. Студент должен уметь:
3.2.1. Написать реакции ЦТК, и челночных механизмов
(глицеролфосфатный, малатаспартатный) и объяснить их биологическую роль.
3.2.2. Объяснить смысл работы цепи терминального окисления.
3.2.3. Провести расчет энергетического выхода аэробного дихотомического окисления глюкозы.

4. Мотивация:

Знания и навыки, приобретенные на занятии, необходи
мы для понимания механизмов развития патологических состояний,
связанных с процессами нарушения образования энергии
( например, сахарный диабет, голодание и др.).

^ 5. Задание для самоподготовки:


Студенты должны изучить рекомендуемую литературу, используя вопросы для самоподготовки.
Основная литература
5.1. повторить лекционный материал по теме: " Цикл трикарбоновых
кислот. Биологическое окисление."
5.2. использовать при подготовке учебник Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. "Биологическая химия" М., Медицина 1990 г. С. 305-315, 345- 352
5.3 Биохимия (учебник для ВУЗов под ред. чл.- .корр. РАН, проф. Е.С.Северина, М. 2003, С.264-294
Дополнительная литература
5.4. изучить раздел в учебнике Марри Р. "Биохимия человека" М., Мир.1993 г. С. 118-136, 172-177.
5.5. использовать книгу Мусил Я. "Современная биохимия в схемах" М., Мир. 1984 г. С. 88-94, 114-122.
5.6. подготовиться к тестовому контролю

^ 6. Вопросы для самоподготовки:


6.1. Основные этапы аэробного дихотомического окисления углеводов.
6.2. В каком органоиде клетки локализованы ферменты ЦТК и
тканевого дыхания?
6.3. Какие реакции ЦТК являются энергопоставляющими и почему?
Приведите примеры.
6.4. Биологическая роль ЦТК.
6.5. Какие вещества являются ингибиторами ЦТК? Приведите при-
меры, укажите тип ингибирования.
6.6. Что такое цепь терминального окисления, каков смысл его
работы?
6.7. Строение НАД+, ФАД, цитохромов и их функциональная роль в
системе тканевого дыхания.
6.8. Укажите звенья в цепи терминального окисления, сопряженные с синтезом АТФ.
6.9. Хемиосмотическая теория Митчелла. Как называется процесс
образования АТФ в дыхательной цепи?
6.10. Коэффициент эффективности тканевого дыхания Р/О, чему он
может быть равен в интактной клетке?
6.11. Разобщение окисления и фосфорилирования, факторы его
вызывающие. Биологическая роль.
6.12. Ингибиторы тканевого дыхания. Механизм действия ингибиторов.
6.13. Пастеровский эффект. Челночные механизмы переноса НАДН из цитоплазмы в митохондрии (глицеролфосфатный, малатаспартат-
ный).

  1. Энергетический выход окисления глюкозы в аэробных условиях.

7

^ . Этапы занятия, контроль усвоения и распределения учебного времени.



N Рї\Рї

Этапы проведения занятия

Формы проведения

Время (мин.)

7.1

Постановка задачи.

Излагает преподаватель.

5

7.2

Контроль исходного уровня знаний.

Тестовый контроль

10

7.3

Разбор теоретического мате-
риала.
Приобретение практических навыков - умение написать соответствующие реакции и сформулировать биологическую роль процесса

Опрос студентов, дис-
РєСѓСЃСЃРёСЏ .

160

7.5

Подведение итогов занятия.

Излагает преподаватель.

5

Пример билета проверочного контроля


1. Приведите пример энергиюпоставляющей реакции Ц.Т.К.
2. Что такое коэффициент Р/O, его значения в интактной клетке?

^ Тестовый контроль по теме : «Аэробное окисление глюкозы,


биологическое окисление»


Тест 1
Выберите правильный ответ:

Локализация ЦТК:


а) эндоплазматический ретикулум
Р±) СЏРґСЂРѕ
в) цитоплазма
г) матрикс митохондрий
д) внутренняя митохондр. мембрана
Тест 2
Выберите правильный ответ:

^ Регуляторная реакция ЦТК:


а) сукцинат → фумарат
б) ацетил-КоА + оксалоацетат → цитрат
в) малат → оксалоацетат
г) цитрат → цисаконитат
д) сукцинилКоА → сукцинат
Тест 3
Выберите правильнЫЙ ответ:

^ Связь ЦТК и тканевого дыхания осуществляется за счет:


а) поступления из ЦТК в дыхательную цепь О2
б) поступления из ЦТК в дыхательную цепь АТФ
в) поступления из ЦТК в дыхательную цепь восстановленных коферментов
( НАДН+Н и ФАДН2)
г) поступление из ЦТК в дыхательную цепь ферментов
д) поступление из ЦТК в дыхательную цепь ацетил-КоА
Тест 4
Выберите правильнЫЙ ответ:

^ Реакция субстратного фосфорилирования:


а) сукцинил-КоА → сукцинат
б) изоцитрат → α-кетоглутарат
в) α-кетоглутарат → сукцинил-КоА
г) малат → оксалоацетат
д) цис-аконитат → изоцитрат
Тест 5
Выберите правильнЫЙ ответ:

^ Итог работы ЦТК:


а) 3НАДН+Н+, 1ФАД2Н, 2 АТФ
б) 2НАДН+Н+, 2ФАД2Н, 1 АТФ
в) 3НАДН+Н+, 1ФАД2Н, 1 АТФ
г) 1НАДН+Н+, 1ФАД2Н, 1 АТФ
д) 1НАДН+Н+, 3ФАД2Н, 1 АТФ
Тест 6
Выберите правильный ответ:

^ Компонент дыхательной цепи, на котором происходит разделение Н+ и электронов:


а) цит. с
б) цит. с1
в) ФМН [Fе-S]
Рі) РљРѕQ
д) цит. в
Тест 7
Выберите правильный ответ:

^ Первый участок сопряжения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи:


а) цит. в → цит. с1
б) цит. аа3 → 1/2 О2
в) ФМН [Fe-S] → KoQ
г) НАДН → ФМН [Fe-S]
д) цит. с → цит. аа3
Тест 8
Выберите правильный ответ:

^ Второй участок сопряжения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи:


а) цит. аа3 → 1/2 О2
б) ФМН [Fe-S] → KoQ
в) цит. с → цит. аа3
г) цит. в → цит. с1
д) НАДН → ФМН [Fe-S]
Тест 9
Выберите правильный ответ:

^ Третий участок сопряжения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи:


а) цит. аа3 → 1/2 О2
б) ФМН [Fe-S] → KoQ
в) цит. в → цит. с1
г) НАДН → ФМН [Fe-S]
д) цит. с → цит. аа3
Тест 10
Выберите все правильные ответы:

^ KoQ принимает электроны и Н+ от:


а) сукцинат
б) ацил-КоА
в) глицерол-3-фосфат
г) малат
д) α-кетоглутарат
Тест 11
Выберите все правильные ответы:

^ Субстраты, являющиеся поставщиками электронов и H+ для НАД+:


а) малат
б) изоцитрат
в) цитрат
г) аконитат
д) сукцинат
Тест 12
Выберите все правильные ответы:

^ Субстраты, являющиеся поставщиками электронов и H+ для ФАД :


а) ацил - КоА
б) сукцинат
в) сукцинил-КоА
г) изолимонная кислота
д) фосфоглицерат
Тест 13
Выберите все правильные ответы:

^ Метаболиты ЦТК, объединяющие три вида обмена:


а) оксалоацетат
Р±)

О±

- кетоглутарат
в) изоцитрат
г) цис-акониат
д) ацетил-КоА
Тест 14
Выберите все правильные ответы:

^ Ферменты, катализирующие окислительное декарбоксилирование α-кетоглутарата:


а) изоцитратдегидрогеназа
б) липоилсукцинилтрасфераза
в) дегидролипоилдегидрогеназа
г) α-кетоглутаратдегидрогеназа
д) сукцинатдегидрогеназа
Тест 15
Выберите все правильные ответы:

^ Энергопоставляющие реакции ЦТК:


а) фумарат → малат
б) изоцитрат → α-кетоглутарат
в) α-кетоглутарат → сукцинил-КоА
г) ацетил-КоА + оксалоацетат → цитрат
д) малат → оксалоацетат

Тест 16
Установите соответствие:
«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или несколько раз»

Процессы:



Продукты реакций:



1) окислительное декарбоксилирование ПВК
2) дыхательная цепь
3) гликолиз
4) цикл трикарбоновых кислот

а) НАДН+Н+
б) лактат
РІ) РђРўР¤
г) ФАД2Н
д) ацетил-КоА

Тест 17
Установите строгое соответствие:

^ Компоненты дыхательной цепи:



Строение компонентов дыхательной цепи:



1) цитохром в
2) РєРѕСЌРЅР·РёРј Q
3) ФМН (Fе-S)
4) цитохром аа3

а) содержит гемовое железо
б) содержит негемовое железо
в) содержит гемовое железо и медь
Рі) СѓР±РёС…РёРЅРѕРЅ
д) содержит гемовое железо и медь


Тест 18
Установите соответствие:
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов»

^ Характер действия на дыхательную цепь:



Вещество:



1) разобщители дыхательной цепи
2) ингибиторы дыхательной цепи

а) тироксин в высоких концентрациях
б) цианид
в) 2,4-динитрофенол
Рі) РЎРћ
Рґ) Рќ2S
е) ацетальдегид

Тест 19
Установите соответствие:
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован несколько раз или не использован совсем»

^ Характер действия на дыхательную цепь



Механизм действия на дыхательную цепь



1) разобщители дыхательной цепи
2) ингибиторы дыхательной цепи

а) блокирует звенья дыхательной цепи
б) изменяют трансмембранный потенциал
в) увеличивают образование АТФ
г) снижают выработку АТФ
д) блокируют образование АТФ

Тест 20
Установите СТРОГОЕ соответствие:

^ Дыхательная цепь



Количество АТФ, образующиеся при работе дыхательной цепи



1) полная дыхательная цепь
2) укороченная дыхательная цепь

Р°) 4 РђРўР¤
Р±) 3 РђРўР¤
РІ) 2 РђРўР¤
Рі) 1 РђРўР¤


Тест 21
установите правильную последовательность:

^ Компоненты дыхательной цепи:


а) цит. аа3
б) цит. с
в) цит. в
г) цит. с1
Рґ) РљРѕQ
Тест 22
Установите соответствие:
«для каждого вопроса – несколько правильных ответов»

^ Челночные механизмы переноса цитоплазматического НАДН+Н:



Локализация



  1. глицеролфосфатный

2) малатаспартатный

а) сердце
б) скелетные мышцы
РІ) РјРѕР·Рі
г) соединительная ткань
д) почки


Тест 23
^ ВЫБЕРИТЕ НОМЕР ПРАВИЛЬНОГО ОТВЕТА
Клетки человеческого тела, в которых нет ферментов ЦТК и дыхательной цепи:
а) гепатоциты
б) лейкоциты
в) β – клетки островков Лангерганса
г) эритроциты д) тиреоциты
Тест 24
Установите соответствие:
«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или несколько раз»

Ингибиторы:



Действие на ферменты ЦТК:



  1. малонат

2) фторацетат (по типу летального синтеза)
3) тиоловые яды

а) сукцинатдегидрогеназу
б) малатдегидрогеназу
в) аконитатгидратазу
г) изоцитратдегидрогеназу
д) цитратсинтетазу

Тест 25
Дополните:
Фермент ЦТК, активность которого ингибируется по типу летального синтеза ­__________
Тест 26
Дополните:
Вещества, которые останавливают дыхательную цепь и препятствуют передаче электронов называются __________
Тест 27
Дополните:
Вещества, которые изменяют трансмембранный потенциал и снижают выработку АТФ в дыхательной цепи называются ____________
Тест 28
Дополните:
Тип образования АТФ в ЦТК называется ­­_________ __________
Тест 29
Дополните:
Тип образования АТФ в дыхательной цепи называется­ ______ _______
Тест 30
Дополните:
Компоненты дыхательной цепи, содержащие гемовое железо ___________

^ Ответы: ЦТК. Тканевое дыхание



1 в€’ Рі
2 в€’ Р±
3 в€’ РІ
4 в€’ Р°
5 в€’ РІ
6 в€’ Рі
7 в€’ РІ
8 в€’ Рі
9 в€’ Р°
10 в€’ Р°, Р±, РІ
11 в€’ Р°, Р±
12 в€’ Р°, Р±,Рґ
13 в€’ Р°, Р±, Рґ
14 в€’ Р±, РІ, Рі
15 в€’ Р±, РІ, Рґ

16 в€’ 1Р°, Рґ, 2РІ, 3 Р±, РІ, 4Р°, РІ, Рі
17 в€’ 1Р°, 2 Рі, 3 Р±, 4 РІ
18 в€’ 1Р°, РІ, 2Р±, Рі, Рґ, Рµ
19 в€’ 1Р±, Рі, 2 Р°, Рґ
20 в€’ 1Р±, 2РІ
21 − двгба (последовательность)
22 в€’ 1Р±, РІ, 2 Р°, Рґ
23 в€’ Рі
24 в€’ 1Р°, 2РІ, 3Р°, Р±,Рі
25 − аконитатгидротазва
26 − ингибиторы
27 − разобщители
28 − субстратное фосфорилирование
29 − окислительное фосфорилирование
30 − цитохромы

^ Тема 12. Сигнальные молекулы, механизмы действия.


Гормоны, химическая природа методы определения.


Гормоны гипофиза и щитовидной железы.



  1. Цель занятия:

    Рассмотреть общие механизмы взаимодействия сигнальных молекул с разными типами клеточных рецепторов в зависимости от химической природы сигнальных молекул. Познакомить студентов с современными методами количественного определения гормонов и другими биохимическими подходами оценки гормонального статуса организма.


^ 3. Конкретные задачи


3.1 Студент должен знать Роль и механизмы действия сигнальных молекул. Строение и механизм действия гормонов, как представителей одного из видов сигнальных молекул. Виды клеточных рецепторов и механизмы взаимодействия с ними гормонов. Химическую природу и биологическую роль гормонов гипофиза и щитовидной железы Принципы оценки гормонального статуса организма.
3.2 ^ Студент должен уметь : С помощью качественных реакций определить химическую природу гормона.

4.Мотивация -

врачу необходимо иметь глубокие знания о механизмах регуляции метаболизма на гормональном уровне для возможности коррекции его с помощью лекарственных препаратов.

^ 5. Задание для самоподготовки:


Студенты должны изучить рекомендуемую литературу, используя вопросы для самоподготовки.
Основная литература
5.1. Повторить лекционный материал по теме: " Механизм действия сигнальных молекул, " " Гормоны гипофиза и щитовидной железы"

  1. Использовать при подготовке учебник Березов Т.Т.,

  2. Коровкин Б.Ф. "Биологическая химия" М., Медицина 1998 , С. 248-283, 289-298.

5.4 Биохимия (учебник для ВУЗов под ред. чл.- .корр. РАН, проф.
Е.С.Северина, М., ГЭОТАР-Медиа 2003, С.545-587
5.5 Биохимия (учебник для ВУЗов под ред. чл.- .корр. РАН, проф.
Е.С.Северина, М. 2011, ГЭОТАР-Медиа С.534-560
5.6. Подготовиться к лабораторной работе по методическому пособию:
Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по биологической химии под ред проф. В.А.Дадали, доц. Р.Н.Павловой, Санкт-Петербург., 2008
Дополнительная литература
5.7 изучить раздел в учебнике Марри Р, .Греннер Д, .Мейес П.,
Родуэлл В. "Биохимия человека" М., Мир.1993 , С. 158-192.
5.8. Элиот И., Элиот Д. Биохимия и молекулярная биология.
Из-во НИИ Биомедицинской химии РАМН, М. 2000, С. 138-142, 291-311.
5.9. Лабораторные методы исследования в клинике ( под ред. В.В.Меньшикова) М.:Медицина, 2002-365 с.
5.10. В.С.Камышников Справочник по клинико-биохимическим
исследованиям и лабораторной диагностике. М. «МЕДпресс-информ», 2004
5.11. подготовиться к тестовому контролю


  1. Вопросы для самоподготовки



6.1. Характеристика понятия «сигнальные молекулы»
6.2. Классификация гормонов по химической природе и месту образования
6.3. Механизмы действия гормонов. Характеристика клеточных рецепторов.
6.4. Механизм действия гормонов по прямому типу рецепции.
6.5. Механизм действия гормонов по опосредованному типу рецепции
6.6. Виды мембранных рецепторов

  1. Виды опосредованной передачи сигнала через мембрану (аденилатциклазный, гуанилатциклазный, фосфатидилинозитольный, Са типы передачи сигнала в клетку

  2. Виды вторичных посредников

6.9. Рецептор, представленный тирозиновыми протеинкиназами
( инсулиновый рецептор и рецепторы факторов роста)
6.10. Интернализация рецепторов, биологическая роль интернализации
6.11. Причины возникновения эндокринных нарушений,
характеристика заболеваний отдельных желез внутренней секреции а) гормонов гипофиза ( механизм действия гормонов, клиника гипо и гиперфункции)
б) гормонов щитовидной железы (механизм действия гормонов, клиника гипо и гиперфункции, эндемический зоб).
Пример билета проверочного контроля - см. Тестовый контроль по теме

^ Принципы оценки гормонального статуса организма



  1. Диагностика эндокринной патологии по концентрации метаболитов, обмен которых непосредственно зависит от функции данного гормона.

Преимущество подхода - доступность биохимических методов
Недостаток- изменение концентрации исследуемого метаболита, как правило, бывает связано с несколькими причинами, и для выявления истинной причины требуется проведение дополнительных, иногда нескольких исследований. Тем не менее в клинике используется:
а) определение концентрации глюкозы, для исследования инсулярного аппарата,
б) определение концентрации Na и К для оценки работы надпочечников,
в) определение концентрации Са и концентрации оксипролина, входящего в состав коллагена соединительной и костной ткани для оценки работы паращитовидной железы

  1. Для оценки эндокринного статуса нередко используют функциональные тесты (стимулирующие и ингибирующие)
^ Например нагрузочные
а) тесты с глюкозой для выявления скрытых форм сахарного диабета,
б) нагрузочный тест с инсулином для оценки функции инсулиновых рецепторов.
в) Стимуляция с помощью АКТГ.
До введения АКТГ и через 60 мин. определяют содержание 11-гидрокси кортикостероидов. На фоне здоровья содержание в плазме увеличивается в 2-3 раза, в моче в 5 раз против исходного уровня. При синдроме Иценко-Кушинга увеличение более значительное. При первичной недостаточности коры надпочечников (в отличие от вторичной) рост 11-гидроксикортикостероидов не происходит
3) ^ Диагностика эндокринной патологии с помощью определения концентрации гормонов химическими методами
( определение кортикостероидов). Методы трудоемки и сложны. Часто используют определение не самих гормонов, а продуктов их превращения в организме, например, для определения функционального состояния коры надпочечников определяют концентрацию 17-кетостероидов, являющихся продуктами их обмена, которые выделяются с мочой. У женщин 17-кетостероиды образуются преимущественно из гормонов коры надпочечников, у мужчин 2/3 образуется из гормонов коры надпочечников и 1/3 за счет обменных превращений андрогенов. Повышение содержания 17-кетостероидов наблюдается при болезни Иценко-Кушинга , карциноме надпочечников, снижение при ослаблении функции половых желез и меньше при недостаточности коры надпочечников. Методы очень трудоемки, в настоящее время не используются.

  1. ^ Радионуклидные методы анализа -наиболее широко используемые для анализа концентрации гормонов, некоторых витаминов, и других веществ, присутствующих в крови в малых концентрациях. Для этих целей используется сатурационный ( насыщенный) анализ - метод исследования, основывающийся на конкурентном связывании некоторых веществ ( лигандов) с анализируемым веществом биологического происхождения и его меченым аналогом, добавленным извне. Они конкурируют за лиганд. Очевидно, что чем больше в пробе природного гормона, тем меньше связывается введенного меченого аналога. В качестве лигандов используются антитела, специфические транспортные белки , рецепторные белки органов-мишеней.

Различают следующие виды сатурационного анализа - радионуклидный анализ:

В настоящее время в качестве меток применяются не только радиоактивные нуклиды, но и многие другие вещества:

Лабораторная работа № 9

Качественные реакции на гормоны.


Реактивы и оборудование: 1. 10% раствор NaOH; 2. 1% раствор CuSO4; 3. HNO3 - (конц.); 4. (NH4)OH - (конц.). 5. 1 % раствор Pb(CH3COO)2; 6. 1 % раствор FeCl3; 7. 1 % раствор йодата калия (KIO3); 8. 10% раствор CH3COOH; 9. 1% раствор сульфаниловой кислоты; 10. 5% раствор NaNO2; 11. 10% раствор Na2CO3; 12. 10% раствор сахарозы; 13. H2SO4 - (конц.); 14. Хлороформ; 15. Инсулин; 16. Раствор адреналина, 0,1% разведение (1:10); 17. Тиреоидин; 18. Спиртовой раствор фолликулина или кортизона-ацетата; 19. Пробирки; 20. Водяная баня; 21. Штативы для пробирок.

  1. Качественные реакции на инсулин.



Цветные реакции на инсулин, которые доказывают его белковую природу: а) биуретовая реакция; б) ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты (фенилаланин, тирозин и триптофан);
в) реакция на слабосвязанную серу (цистеин, цистин). См. занятие «Цветные реакции на белки».

1. Биуретовая реакция


Ход работы: к 5 каплям инсулина добавить 5 капель 10% раствора едкого натра и 1 каплю (избыток мешает чтению результатов реакции!!!) 1% раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.
^ 2. Ксантопротеиновая реакция
Ход работы: к 5 каплям инсулина добавить З капли концентрированной азотной кислоты; образуется осадок белка, который при осторожном нагревании на водяной бане окрашивается в желтый цвет.

К охлажденной пробе (!!!)

добавляют избыток аммиака - появляется оранжевое окрашивание вследствие образования хиноидного производного тирозина.
3. Реакция Фоля на слабосвязанную серу
Ход работы: вначале денатурируют белок, добавляя к 5 каплям раствора инсулина 1% раствор уксуснокислого свинца по каплям до выпадения осадка. Затем также по каплям добавляют 10% раствор NaOH до полного просветления жидкости (растворение осадка денатурированного белка). Пробирку нагревают в кипящей водяной бане, пока раствор не окрасится в темный (черный) цвет за счет образования осадка сульфида свинца.

  1. ^ Качественные реакции на адреналин.



Обусловленные наличием кольца пирокатехина в его молекуле.
1. Реакция с хлорным железом: адреналин, в молекулу которого входит фенольное кольцо, образует с хлорным железом соединение типа фенолята.
^ Ход работы: в пробирку внести 2 - 3 капли раствора адреналина (1:10) и 1 каплю 1% раствора хлорного железа. Жидкость окрашивается в изумрудно-зеленый цвет, переходящий при стоянии в желтый.
2. Реакция с йодатом калия (KIO3): продукты хиноидного окисления адреналина окрашивают раствор адреналина в цвета от розового до бурого. В условиях опыта адреналин окисляется а пигмент - галохром, имеющий красно-фиолетовую окраску.
^ Ход работы: в пробирку внести 2 - 3 капли раствора адреналина (1:10), 2 капли 1% раствора йодата калия и 2 капли 10% раствора уксусной кислоты. При легком нагревании появляется красно-фиолетовое окрашивание.
3. Диазореакция

:

при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель красного цвета.
^ Ход работы: в пробирку внести З капли 1% раствора сульфаниловой кислоты, 3 капли 5% раствора азотистокислого натрия, 5 капель адреналина (1:10) и 3 капли 10% раствора углекислого натрия. Жидкость окрашивается в красный цвет.

^ III Качественные реакции на стероидные гормоны.


Основаны на присутствии в молекуле гормона кольца циклопентанпергидрофенантрена при взаимодействии сахарозы с серной кислотой появляется оксиметилфурфурол, образующий со стероидным гормоном соединение, окрашенное в пурпурно-красный цвет.
^ Ход работы: к 5 каплям стероидного гормона добавить 1 каплю 10% раствора сахарозы. После тщательного перемешивания осторожно по стенке пробирки добавить концентрированную серную кислоту. На границе двух жидкостей появляется пурпурно-красное кольцо.

^ IV. Качественные реакции на йод в тиреоидине


Принцип метода: тиреоидин (препарат, полученный из щитовидной железы животных) подвергается кислотному гидролизу: отщепившуюся йодисто-водородную кислоту окисляют в свободный йод йодноватистокислым калием:

Свободный йод экстрагируют хлороформом. Раствор йода в хлороформе окрашен в фиолетовый цвет.
^ Ход работы: в пробирку вносят половину таблетки тиреоидина и 10 капель концентрированной азотной кислоты. Для проведения гидролиза пробирку нагревают 1-2 мин на водяной бане (если жидкость вспенивается, нагревание прекращают). Затем добавляют в пробирку 20 капель раствора йодноватистокислого калия, раствор осторожно перемешивают и охлаждают. Добавляют в пробирку 10-15 капель хлороформа, встряхивают и отмечают, что хлороформ (нижний слой) окрасился йодом в фиолетовый цвет.
Полученные результаты оформить в виде следующей таблицы.

Название железы
внутренней секреции

Название
РіРѕСЂРјРѕРЅР°

Название реакции

Окрашива-
РЅРёРµ

Вывод


(химическая природа
Гормона)

1









2









3








2010-07-19 18:44 Читать похожую статью
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • © Помощь студентам
    Образовательные документы для студентов.